引物合成儀溶解和保存引物的方式
更新時間：2022-01-17 點擊次數(shù)：3689
引物合成儀合成步驟： 1、脫掉附加在CPG擔體上的第一個堿基5' -OH基團上的保護基 (DMTr)，準備附加下一個新的堿基；
2、活化新的堿基單體，準備與第一個堿基進行反應；
3、第二個堿基與第一個堿基發(fā)生偶聯(lián)反應；
4、將沒有反應的第一個堿基的5' -OH加帽封死 ，使其不再進一步參與反應；
5、將核苷亞磷酸酯氧化成更穩(wěn)定的核苷磷酸酯 (即將三價磷氧化成五價磷)。
6、重復進行1～5的循環(huán)，直至合成完所需的Oligo DNA序列。
7、合成結束后，將Oligo DNA分子從CPG上切下，再進行進一步的純化。
引物合成儀溶解和保存引物的方式：
干燥后的引物質(zhì)地非常疏松，開蓋前最好離心一下，或管垂直向上在桌面上敲敲，將引物粉末收集到管底。根據(jù)計算出的體積加入去離子無菌水或 10mM Tris pH7.5 緩沖液，室溫放置幾分鐘，振蕩助溶，離心將溶液收集到管底。溶解引物用的水一般不要用蒸餾水，因為有些蒸餾水的 pH 值比較低（ pH4-5 ） , 引物在這種條件下不穩(wěn)定。
引物合成后，經(jīng)過一系列處理和純化步驟，旋轉干燥而成片狀物質(zhì)。引物在溶解前，室溫狀態(tài)下可以長期保存。溶解后的引物 -20 度可以長期保存。如果對實驗的重復性要求較高，合成的 OD 數(shù)較大，建議分裝，避免反復凍融。修飾熒光引物需要避光保存。
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